Исследователи из Калифорнийского университета в Лос-Анджелесе создали биспецифические антитела, которые связывают одновременно цитотоксические CD8+ Т-лимфоциты и клетки, инфицированные цитомегаловирусом, в результате последние уничтожаются. Новые антитела больше по размеру и менее активные, чем ранее предложенные антитела для иммунотерапии цитомегаловирусной инфекции, но у них есть одно преимущество — намного более длительный срок полужизни в организме.
Credit:
123rf.com
Цитомегаловирус (CMV) — один из наиболее распространенных патогенов человека; до 60–90% взрослого населения являются его носителями. У большинства инфекция протекает бессимптомно, однако врожденный CMV остается ведущей негенетической причиной глухоты у детей, а у пациентов с тяжелым иммунодефицитом вирус вызывает угрожающие жизни инфекции. Доступные противовирусные препараты токсичны для костного мозга и почек, также достаточно часто у вируса вырабатывается устойчивость. В связи с этим есть необходимость в создании новых подходов к терапии. Цитотоксические T-клетки играют важную роль в подавлении активной инфекции CMV, так что, вероятно, можно применить иммунотерапию.
Ученые из Калифорнийского университета в Лос-Анджелесе разработали новые биспецифические антитела, перенаправляющие Т-клетки (TRBA), которые связывают CD3ε на Т-лимфоцитах и вирусный белок gH на поверхности инфицированных клеток. Ранее TRBA использовались для лечения онкологических заболеваний. В новой работе авторы объединили вариабельные домены анти-CD3 антитела 12F6 и анти-CMV gH антитела 21E9. При этом они использовали две стратегии: crossover dual variable, предусматривающую разнонаправленное расположение вариабельных доменов легких и тяжелых цепей, и модификация IgG3 с добавлением одноцепочечного антитела против gH к С-концу тяжелой цепи.
Полученные конструкции экспрессировали в клетках Expi293F, очищали и верифицировали с применением SDS-PAGE и вестерн-блоттинга. Для функциональных испытаний использовали первичные CD8+ Т-клетки, выделенные из крови доноров, и клетки ARPE-19, инфицированные штаммом CMV TB40/E, несущим репортерный ген GFP. Способность антител к связыванию оценивали методом проточной цитометрии, элиминацию инфицированных клеток отслеживали флуоресцентной микроскопией с подсчетом GFP-положительных клеток, а секрецию интерферона-γ измеряли с помощью ELISA. Динамику взаимодействия Т-клеток с зараженными клетками дополнительно фиксировали методом таймлапс-микроскопии.
Авторы показали, что все варианты TRBA надежно связывались как с CD8+ Т-лимфоцитами, так и с CMV-инфицированными клетками, а при ко-культивировании вызывали дозозависимое уничтожение зараженных клеток. Максимальный эффект наблюдался при концентрации 10–20 мкг/мл. Одновременно регистрировался рост уровня IFN-γ, указывающий на специфическую активацию Т-клеток. Флуоресцентная визуализация позволила показать формирование кластеров цитотоксических лимфоцитов вокруг GFP-положительных клеток и их постепенное разрушение.
Молекулярная масса полученных конструкций составляла 210–222 кДа, что выше, чем у ранее описанных CMV-специфических BiTE (55 кДа) и гетеродимерных IgG (150 кДа). Несмотря на то, что по активности in vitro новые антитела уступали BiTE и гетеродимерным IgG, наличие Fc-домена дает им важное преимущество: увеличенный до 10–14 дней срок полужизни в организме, а также возможность рекрутировать дополнительные эффекторные механизмы, такие как антителозависимая клеточная цитотоксичность.
Авторы подчеркивают, что их конструкции содержат по два сайта связывания для каждого антигена, тогда как у большинства ранее созданных TRBA имеется лишь один, что теоретически может повысить эффективность в клинических условиях. Кроме того, впервые мишенью стал белок gH (предыдущие разработки были направлены против gB).
Таким образом, исследование продемонстрировали перспективность новых TRBA для иммунотерапии тяжелых CMV-инфекций у пациентов с ослабленным иммунитетом. Конструкции обладают направленным действием против зараженных клеток и потенциально более удобны для клинического применения за счет пролонгированного времени циркуляции и дополнительных иммунных эффектов.
Источник:
Ayub Ali, et al. Bispecific antibodies cross-link and redirect CD8+ T cells to kill cytomegalovirus-infected cells. // Sci. Adv.11,eady2092. Published online: 12 September 2025. DOI: 10.1126/sciadv.ady2092